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    技術文章

    核酸提取磁性微球提取純化的方法

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       核酸提取磁性微球通過對磁珠進行一定的包被(如硅基、氨基、羧基等),從而可以實現對核酸的高通量、自動化提取。磁珠是一類特殊的納微米材料,它們的尺寸通常在零點幾微米到幾微米之間,僅為一根頭發絲直徑的十幾分之一到幾十分之一,肉眼是無法觀測到單個磁珠的。它們具有超順磁性,在磁場中可以向一側迅速移動,聚集在一起,而去除磁場后又能夠迅速恢復到分散狀態。
      
      核酸提取磁性微球提取純化的方法:
      1、酚/氯仿抽提法
      通過酚/氯仿處理細胞破碎液或者組織勻漿后,在水相中主要溶解以DNA為主的核酸成分,在有機相中主要是脂類物質,蛋白質位于兩相之間。
      2、醇沉淀法
      乙醇能夠消除核酸的水化層,使帶負電荷的磷酸基團暴露出來,NA﹢等帶正電荷離子能與磷酸基團結合,形成沉淀。
      3、層析柱法
      通過特殊硅基質吸附材料,能夠特定吸附DNA,而RNA和蛋白質順利通過,然后利用高鹽低PH結合核酸,低鹽高PH值洗脫,來分離純化核酸。
      4、熱裂解堿法
      堿法提取主要是利用共價閉合環狀質粒與線性染色質在拓撲學上的差異來分離他們,在堿性下,變性蛋白是可溶的。
      5、煮沸裂解法
      加熱處理DNA溶液,利用線性DNA分子的特性,通過離心將DNA片段與變性蛋白質和細胞碎片形成的沉淀分離。
      6、納米磁珠法
      運用納米技術對超順磁性納米顆粒的表面進行改良和表面修飾后,制備成超順磁性氧化硅納米磁珠。該磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識別和高效結合。利用氧化硅納米微球的超順磁性,在Chaotropic鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場的作用下,從血液、動物組織、食品、病原微生物等樣本中分離出DNA和RNA。
      7、其他方法
      除了上述常用的方法之外,還有超聲法、反復凍融法、酶解法及低滲裂解等等多種方法。




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